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　　在宠物营养补充剂中添加CBD油，可以有效改善宠物从焦虑到肿瘤的各种疾病。我们使用液相色谱-质谱(LC-MS)对实际的CBD油宠物营养补充剂样品进行了非靶向分析，以筛查产品中真菌毒素的存在。

　　实    验

　　1. 仪器与材料

　　含CBD油的宠物营养补充剂样品用二氯甲烷稀释500倍。然后将50微升稀释后的样品加入950微升甲醇中。在Agilent 1260 Prime / 6125 LC/MS XT系统上进行分析，色谱柱为Poroshell C18（2.1 mm x 100 mm, 1.9μm)，流动相A为0.1% (v/v)甲酸-水溶液，流动相B为0.1% (v/v)甲酸-甲醇溶液。流动相梯度变化为72% A ~ 95% A，运行时间为15分钟，后运行时间为2分钟。

质谱数据校正

图1为五种真菌毒素的大麻籽油加标样品的TIC图。

图1：五种真菌毒素的大麻籽油加标样品在MassWorks

　　软件中，黄曲霉毒素B2作为质谱校正标样，将单四极杆LC/MS数据校正为精确质量数据，校正的质量误差小于1mDa，谱图准确度（Spectral Accuracy）优于99%，见图2。

图2：MassWorks质谱校正结果。

　　为了验证该方法对精确质量测量的准确度和对未知真菌毒素的鉴定能力，我们在MassWorks将该校正应用于五种真菌毒素，即可得到它们的精确质量数据，并以±20mDa质量误差窗口和C/H/N/O/Cl作为可能的元素，使用CLIPS功能对它们进行分子式分析，得到分子式的谱图准确度结果，见图3。

图3：五种真菌毒素的精确质量和分子式谱图准确度结果

从图3的结果可以看出，结合MassWorks的精确质量和谱图准确度，我们可以对5种真菌毒素中的4种进行可靠的鉴定。例如，黄曲霉毒素G2，测定的质量误差仅为0.5 mDa，分子式的谱图准确度为98.1%，排在全部89个候选分子式的第一位，说明了MassWorks对它实现了准确的鉴别。而赭曲霉毒素A由于其极低的信号响应和质谱干扰，降低了其鉴别结果的置信度，它的谱图准确度仅为86.0%。

图4：黄曲霉毒素G2的鉴定结果表明，排序第一的分子式谱图准确为98.1%，理论同位素和校正同位素完美匹配

　　3. 样品分析结果及讨论

当我们将校正应用于大麻籽油样品TIC图中的主峰时，我们发现用C/H/N/O/Cl元素进行的CLIPS检索鉴定不能解释A+2信号，只有添加S元素后才能对其进行高谱图准确度的鉴定，这也表明了该化合物肯定含S元素，分析结果见图5。

　　图5：大麻籽油TIC主峰的分析结果表明，该物质的分子式为C16H27N3S，精确质量误差为14.4mDa，谱图准确度为98.98%

对宠物营养补充剂样品#1，我们想知道MassWorks的精确质量校正方法是否能够区分CBD化合物和5种真菌毒素之一的黄曲霉毒素B2，因为两者的整数质量均在m/z 315处。图6下方的XIC图表明了m/z 315主要在10min后出峰，我们将对这几个峰进行MassWorks软件的CLIPS分析。

图6：宠物营养补充剂样品#1的TIC图和m/z 315的XIT图

Rt=10.25min峰的精确质量测定结果为m/z 315.2312，质量误差小于1mDa，排序第一的分子式C21H30O2的谱图准确度为98.2%（见图7），结果表明该物质为CBD化合物。尽管它的整数质量与黄曲霉毒素B2一样，但是精确质量和谱图准确度告诉我们，我们可以正确地区别和鉴定它们。

图7：CBD化合物的鉴定结果

通过CLIPS分析还正确地确认了在10.5min峰位置中发现的CBD同分异构体，质量误差为-10mDa，谱图准确度为94.8%，见图8。

图8：CBD的同分异构体的鉴定结果

　　10.65min峰的CLIPS未知元素组成分析表明，它不属于CBD类，也与黄曲霉毒素B2完全不同。

图9：10.65min峰的分子式结果为C23H24O，谱图准确度为98.37%

最后一个11min峰的结果表明，它是另一种类型的CBD化合物，其质量精度为7mDa，光谱精度为98.9%。

图10：11min峰的分子式结果为C21H32O3，谱图准确度为98.87%

 结论

1）单四极杆LC/MS系统可以获得精确质量和谱图准确度，这可以帮助我们去进行未知物的鉴定，是一种有用且经济的宠物营养补充剂分析工具，可用于活性CBD化合物或可能的真菌毒素污染物的筛查。

2）尽管一些化合物有相同的整数m/z，但MassWorks的精确质量和谱图准确度能对他们进行鉴定和区分，如本文中的CBD和黄曲霉毒素B2(整数质量都在m/z 315处)。

关于MassWorks

　　软件MassWorks软件是由 Cerno Bioscience 公司开发的一款革命性的MS数据定性分析软件，能帮助我们在低分辨率的四极杆GC/MS、LC/MS直接测定化合物的精确质量，并通过独有的谱图准确度概念确定出准确的分子式。MassWorks软件同样适用于高分率质谱（TOF、Orbitrap）的定性分析。

关于绿绵科技

绿绵科技是Cerno Bioscience公司在中国区的总代理商，负责Cerno公司旗下的MassWorks、GC/ID 等产品市场推广、销售、售前/售后技术支持、应用支持。若您想了解获取 MassWorks 产品的更多信息或应用，欢迎致电绿绵科技！