美国Cerno Bioscience公司的MassWorks软件可以通过使用已知的标准物质创建的校正函数，将在轮廓图（Profile）模式下采集的四极杆质谱数据转换为精确质量数据。通过将校正函数应用于MS数据，可以计算精确质量到小数点后4位，并且还可以同时进行同位素分布轮廓的校正，通过将得到的结果与理论值进行比较，可以计算出同位素的谱图准确度并预测化合物的分子式。

在下面的案例分享中，使用热裂解Py-GC/MS结合MassWorks软件分析邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯(DEHP)的杂质并确认其分子式。

Py-GC/MS分析DEHP未知热裂解产物

以聚氯乙烯（PVC）垫为样品，对作为增塑剂的邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯的杂质进行了分析。GC/MS仪器为Agilent 7890B-5977A，热裂解装置为EGA/PY-3030D。

图1显示了PVC垫中DEHP及其杂质的总离子图(TICC)。邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯之后洗脱的峰在EI质谱上观察到高强度的m/z 149，因此可以推测为邻苯二甲酸酯。对于峰①和峰②，使用PICI法和MassWorks软件进行定性分析。

图1：DEHP及其杂质的TICC

1. 未知物峰①的分子式的确定

峰①从EI谱图的谱库检索结果（图2）以及碎片离子的m/z 307来看，它属于某一种癸酯，但由于在EI谱图没有观察到分子离子，所以无法推测到底属于哪一种酯。在以甲烷为试剂气体的PICI方法中，在质谱上观察到加合离子C2H5+和C3H5+，在使用2%单甲胺/甲烷的PICI方法中，在质谱图上观察到加合CH3NH3+的分子量相关离子，很容易估计分子量为446。

图2：峰①的EI谱库检索结果

EI和PICI的质谱如图3所示。为了提高定性准确性，在MassWorks软件中对加和离子进行了精确分子量及分子式分析。

图3：峰①的EI和PICI质谱图

MassWorks测定的[M+H]离子的精确质量为m/z 447.3602，根据图4所示的分子式CLIPS检索条件，得到分子式的分析结果见图5 。排序第一的分子式C28H47O4（邻苯二甲酸二癸酯的M+H离子），其质量误差为29.7 ppm，同位素谱图准确度为98.8%。

图4：分子式检索的CLIP检索条件设置

图5：峰①的分子式分析结果（上）；C28H47O4的理论同位素（黑）和校正同位素轮廓的对比（下）

2. 未知物峰②的分子式的确定

从EI谱图的谱库检索结果（图6）可以看出峰②与偏苯三酸三（2-乙基己基）的谱图相似。

图6：峰②的EI谱图检索

由于在EI中没有观察到分子离子，尝试了不同气体的PICI方法，最终推断出分子量为546。图7分别显示了EI和PICI的谱图。在MassWorks软件中对甲烷-PICI谱图的[M+H]+离子、2%单甲胺/甲烷-PICI谱图的M+H]+和[M+CH3NH3]+离子进行了分子式的分析。

图7：峰②的EI和PICI谱图

由于甲烷-PICI谱图的[M+H]+离子信号较弱，C33H55O6（偏苯三酸三（2-乙基己基）C33H54O6的M+H离子）仅排在第7位（质量误差-14.0 ppm，谱图准确度98.7）。2%单甲胺/甲烷-PICI谱图的[M+H]+分析结果显示C33H55O6是第一候选分子式（质量误差-0.9 ppm，谱图准确度98.6），2%甲胺/甲烷-PICI的[M+CH3NH3]+离子的分析结果中，C34H60O6N（（偏苯三酸三（2-乙基己基）的[M+CH3NH3]+离子）是第一候选分子式（质量误差0.3 ppm，谱图准确度99.4）。根据这些结果，可以确定出峰②的分子式很可能是C33H54O6。

3. 小结

在EI谱图无法获得分子离子时，通过组合使用甲烷和2%单甲胺/甲烷试剂气体，PICI方法可以使得分子量的确认变得更容易，再通过使用MassWorks计算多个离子的化学式，可以得到准确的分子式分析结果。

//www.agilent.com.cn/cs/library/applications/GC-MS-201510NK-001.pdf

MassWorks软件是由 Cerno Bioscience 公司开发的一款革命性的MS数据定性分析软件，能帮助我们在低分辨率的四极杆GC/MS、LC/MS直接测定化合物的精确质量，并通过独有的谱图准确度概念确定出准确的分子式。MassWorks软件同样适用于高分率质谱（TOF、Orbitrap）的定性分析。

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