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CEInfinite质谱直联型全柱成像等电聚焦iCIEF

CEInfinite iCIEF-MS Online coulping platform

在蛋白质生物制品的开发和生产中，由于翻译后修饰(PTMs)和降解，会产生目标蛋白质的电荷异构体。生物制药公司依靠毛细管等电聚焦(CIEF)和成像CIEF (iCIEF)来量化电荷异构体。表征生物电荷异构体对于许多生命周期阶段都是有用的，包括细胞系选择、稳定性研究、配方和过程控制，但是这种表征需要将蛋白质分离成具有足够纯度的单个电荷异构体的馏分以用于下游分析。

此外，iCIEF与用于表征的质谱仪(MS)的直接耦合将显著简化表征过程。

AES开发了CEInfinite制备型iCIEF系统和专有的全柱成像检测(WCID)分离柱，用于iCIEF-WCID的分离和与MS在线耦合，允许实时观察分离聚焦(iCIEF)动态以及随后分离电荷异构体峰的迁移过程。在压力迁移过程中，电场使分离毛细管中的样品保持聚焦。分离毛细管的内径较大，而传输毛细管的内径较小。因此，这种内径的差异极大地减少了分离的蛋白质异构体在离开小柱时的扩散与再混合。

详情介绍

CEInfinite iCIEF-MS的亮点

• 直接将iCIEF-MS与Thermo Fisher Scientific、Waters和Bruker的传统低流量或高灵敏度纳流ESI联用。

• 任何缓冲液或溶液都可以用作补充液。不涉及化学迁移。蛋白质电荷变异体在根据pI不同依次被引入MS。
  

• CE-MS可以直接从任何现有的iCIEF或CIEF方法转换而来。在低和高样品浓度下都能获得良好的分离度。

NIST mAb 样品的iCIEF-MS分析

iCIEF-UV(红色)和iCIEF-MS(蓝色)可清晰观察到电荷异构体的Profile，并且获得了所有变异体峰的优异MS谱图，这允许我们对大多数完整的NIST mAb电荷变体进行解卷积。

结果表明，碱性峰B1和B2主要是C端赖氨酸的异构化造成的，酸性峰A1分子量与主峰差异较小，可能是由于脱酰胺等修饰造成的，需要通过制备型iCIEF做进一步的研究和确认。

来自客户的评价：

“iCIEF在生物制药开发过程中监控电荷变化方面发挥着至关重要的作用。CEInfinite允许我们获得iCIEF检测到的产物变体的质量读数，这对于理解电荷变异体的化学性质有很大的帮助。当将CEInfinite与Orbitrap MS系统提供的高分辨率精确质谱结合使用时，可以获得对产品变异体和产品稳定性的详细了解。

简而言之，使用CEInfinite的iCIEF-MS是生物制药开发中非常强大的表征工具。"

-Dan Bach  Kristensen博士

Symphogen首席科学家